Prueba antígeno

Sobre el Método Elisa

Además de la medición de la carga vírica (por ejemplo mediante RT-PCR en tiempo real) de muestras de las vías respiratorias, los análisis serológicos destinados a localizar inmunoglobulinas específicas son otra forma de identificar a las personas que han estado expuestas al SARS‑CoV‑2.2 De hecho, la mayoría de los pacientes con COVID‑19 han presentado respuesta de anticuerpos al menos diez días después de la aparición de los signos y síntomas. Esta respuesta de anticuerpos se caracteriza por una elevación temprana de las inmunoglobulinas de tipo M (IgM), seguida de otra de las inmunoglobulinas G (IgG). Es más, las pruebas de neutralización séricas y los cultivos víricos han puesto de manifiesto la presencia de anticuerpos neutralizantes, la cual guardaba correlación con la presencia de IgG, en la que se reconocía la adición, y con la nucleoproteína del SARS‑CoV‑2.

Límites de la Prueba

• Pueden producirse interferencias con determinados sueros que contengan anticuerpos dirigidos contra los componentes del reactivo. Por este motivo, se deben interpretar los resultados del test teniendo en cuenta la historia clínica del paciente, así como los resultados de otras pruebas que se hayan realizado.

• Los resultados obtenidos con muestras de pacientes infectados por el SARS-CoV-2 deben interpretarse con cautela.

• Este test está destinado a la detección cualitativa solamente. El valor de la prueba no sirve para determinar la cantidad de anticuerpos IgG frente al SARS‑CoV‑2.

• La magnitud del resultado medido por encima del umbral no es indicativa de la cantidad total de anticuerpos presentes en la muestra.

• La respuesta inmunitaria individual después de una infección por SARS-CoV-2 varía considerablemente y podría dar resultados diferentes con ensayos de diferentes fabricantes. Los resultados de los ensayos de diferentes fabricantes no deben utilizarse indistintamente.

Distribución del índice de IgM e IgG después de la aparición de los síntomas

La figura muestra la distribución de los resultados de SARS-COV-2 IgM (índice) de 60 pacientes, según el número de días después de la aparición de los síntomas. Esta figura muestra que la IgM se detecta principalmente después del 7.º día y comienzan a disminuir 3 semanas después de la aparición de los síntomas. Para completar los resultados sobre la respuesta de los anticuerpos, se recomienda la atención de la prueba  SARSCOV-2 IgG.

La figura muestra la distribución de los resultados de  SARS-COV-2 IgG en 67 pacientes, según el número de días después de la aparición de los síntomas. El desarrollo de anticuerpos IgG es posterior y de mayor duración que los IgM (No se ha determinado la duración de estos)

Número de días después del resultado positivo en RT-PCR en Tiempo Real

Índice IgM Interpretación de  IgM Índice de IgG Interpretación de IgG

Paciente 1

0 días 0,06 Negativo 0,02 Negativo

7 días 1,20 Positivo 0,44 Negativo

14 días 2,81 Positivo 4,49 Positivo

20 días 2,37 Positivo 5,75 Positivo

Paciente 2

0  días 0,01 Negativo 0,01 Negativo

7 días 0,63 Negativo 0,06 Negativo

14 días 4,30 Positivo 3,70 Positivo

20 días 3,31 Positivo 8,74 Positivo

Paciente 3

0 días 0,05 Negativo ≤ 0,00 Negativo

5 días 2,13 Positivo 0,17 Negativo

14 días 16,74 Positivo 33,00 Positivo

26 días 16,73 Positivo 34,33 Positivo

Una prueba rápida de diagnóstico in vitro para la detección cualitativa del antígeno (Ag) del SARS-CoV-2 en muestras nasofaríngeas humanas con hisopo de personas que cumplen los criterios clínicos y/o epidemiológicos de la COVID-19.

Prueba Rápida COVID-19 Ag  es solo para uso profesional y está destinado a utilizarse como ayuda en el diagnóstico de la infección por SARS-CoV-2. El producto se puede utilizar en cualquier entorno tanto en el laboratorio como en el servicio a domicilio, siempre que cumpla con los requisitos especificados en las Instrucciones de uso y la normativa local.

La prueba proporciona resultados preliminares de análisis. Los resultados negativos no descartan la infección por SARS-CoV-2 y no se pueden utilizar como el único fundamento para un tratamiento u otras decisiones de gestión. Los resultados negativos deben combinarse con observaciones clínicas, historial del paciente e información epidemiológica. La prueba no está diseñada para usarse como prueba de detección de donantes para el SARS-CoV-2.

• Para pacientes con sospecha de infección actual por COVID-19

• Respuestas rápidas para los pacientes: resultados de la prueba en 15–20 minutos

• Fiable, alto rendimiento*

– Sensibilidad: 93,3 % (98,2 % para muestras con valores de Ct ≤33)

– Especificidad: 99,4 %

• Para implementar en el punto de atención en una variedad de escenarios

• La solución accesible permite realizar pruebas a gran escala

El análisis clínico detecta ARN viral mediante amplificación por PCR y detección de fluorescencia utilizando PCR en tiempo real de transcriptasa inversa (rRT-PCR). La detección de ARN viral no solo ayuda en el diagnóstico de enfermedades antes, durante y despues del desarrollo de síntomas, sino que también proporciona información epidemiológica y de vigilancia.

Limitaciones de la prueba: No se han determinado los tipos óptimos de muestras y el momento para los niveles virales máximos durante las infecciones causadas por 2019-nCoV. No se ha establecido el rendimiento de esta prueba para controlar el tratamiento de la infección 2019-nCoV. Puede ser necesario recolectar múltiples muestras (tipos y puntos de tiempo) del mismo paciente para detectar el virus. Puede producirse un resultado falso negativo si una muestra se recoge, transporta o manipula de forma inadecuada, si hay inhibidores de amplificación en la muestra o si hay una cantidad inadecuada de organismos presentes en la muestra. Los valores predictivos positivos y negativos dependen mucho de la prevalencia. Los resultados falsos negativos de la prueba son más probables cuando la prevalencia de la

enfermedad es alta. Los resultados positivos falsos son más probables cuando la prevalencia es moderada a baja. Si el virus muta en la región objetivo de rRT-PCR, Es posible que 2019-nCoV no se detecte de manera confiable. No se han realizado posibles estudios de interferencia.

MÉTODO DE ANÁLISIS: Modelado después del protocolo Autorizado para Uso de Emergencia (EUA) desarrollado por el  Centros para el Control y Prevención de Enfermedades  (CDC), el ARN se aísla de la muestra y se analiza la presencia de regiones genéticas específicas (nucleocápside viral) mediante PCR de transcriptasa inversa en tiempo real. Los reactivos de prueba EUA contienen cebadores oligonucleotídicos y sondas de hidrólisis de doble marca (TaqMan®) y material de control utilizado en rRT-PCR para la detección cualitativa in vitro. Las sondas fluorescentes se combinan con la secuencia objetivo ubicada entre los cebadores directo e inverso. La actividad de la nucleasa de la polimerasa Taq degrada la sonda, lo que hace que el colorante indicador se separe del colorante inhibidor, generando una señal fluorescente más fuerte con cada ciclo de PCR. Este ensayo se desarrolló utilizando reactivos EUA, y su característica de rendimiento determinada por el laboratorio. La muestra para determinar la presenciá de COVID-19 es tomada en nuestro laboratorio ubicado en Torre Médica Záfiro, Segundo Nivel, Colonia Tepeyac, Tegucigalpa M.D.C. El  Laboratorio que realiza la prueba diagnóstica está acreditado por el Colegio de Patólogos Americanos (CAP) y regulado por las Enmiendas de Mejora del Laboratorio Clínico (CLIA) como calificado para realizar pruebas moleculares de alta complejidad.

Nuestra prueba rápida de inmunoensayo, que detecta la presencia de IgG específica de SARSCoV-2 e IgM general para el diagnóstico cualitativo de COVID-19 en etapa temprana y tardía.  La IgG es específica del SARS-CoV-2 y confirma la enfermedad secundaria (generalmente> 7 días), mientras que la IgM confirma la enfermedad primaria (3-9 días). Ambos están elevados en la enfermedad secundaria y pueden usarse para confirmar el diagnóstico. Hipotéticamente, la detección de estos biomarcadores debería descartar otras infecciones virales y diagnósticos falsos, permitiendo la confirmación de COVID-19.

Para ensamblar el casete, se movilizan IgG e IgM antihumanas sobre una membrana de nitrocelulosa para generar las dos líneas de prueba y se usan otros anticuerpos para generar la línea de control. La almohadilla de conjugación contiene nanopartículas de oro conjugadas con antígeno específico de COVID-19 (para prueba) u otros anticuerpos (para control). Todos los componentes se ensamblan en una base de tarjeta adhesiva y se encierran en una carcasa de plástico.

Para la prueba, la muestra (sangre completa, suero o plasma) se coloca en la entrada, antes de agregar una solución tampón. Cualquier IgG / IgM presente en la muestra se unirá al conjugado antígeno oro-COVID-19 y fluirá a las dos líneas de prueba, que capturarán cualquier IgG / IgM en la muestra. La línea de control capturará el otro conjugado de oro-anticuerpo, confirmando que la prueba es válida. A los 15 minutos, aparecerán líneas de prueba para IgG e IgM para un resultado positivo, y una línea de control para el control de calidad. Solo se requiere una línea de prueba (IgG o IgM) para un diagnóstico positivo. Esta prueba tiene las ventajas de ser portátil, rápida y de bajo costo.

•  Pacientes y contactos asintomáticos (Manejo ambulatorio en el hogar) 

 Parámetros: En estos pacientes no es necesario la realización de exámenes complementarios.  Manejo:  Aislamiento en el Hogar con lavado frecuente y adecuado de manos  y todos sus utensilios.  

•  Paciente sin signos de alarma ni factores de riesgo, laboratorialmente normal con síntomas leves 

Parámetros:  Oximetría de Pulso: mayor de 94%, Hemograma seriado: normal, linfopenia con o sin neutrofilia, Proteína C Reactiva: Negativa, RX: Normal. Manejo:  Aislamiento en el Hogar con lavado frecuente y adecuado de manos  y todos sus utensilios.

•  Paciente con factores de riesgo, sin signos de alarma y laboratorialmente normal  con síntomas leves 

Parámetros: Oximetría de Pulso: mayor de 94%, Hemograma seriado: normal, linfopenia con o sin neutrofilia, Proteína C Reactiva: Normal, RX PA de tórax: Normal.  Aislamiento en el Hogar con lavado frecuente y adecuado de manos  y todos sus utensilios. Con vigilancia médica, si no se puede realizar revisiones médicas diarias se debe referir al Hospital.

• Paciente con ó sin factores de riesgo con signos de enfermedad respiratoria y parámetros inflamatorios alterados .

Signos de alarma: disnea, taquipnea Parámetros : Oximetría de Pulso: mayor de 94%, Hemograma: linfopenia más pronunciada, neutrofilia ó ambas, Elevación de enzimas hepáticas, Proteína C Reactiva: Positiva, RX: opacidades irregulares de vidrio esmerilado.  Aislamiento en el Hogar con lavado frecuente y adecuado de manos  y todos sus utensilios. Con vigilancia médica, si no se puede realizar revisiones médicas diarias se debe referir al Hospital.  

•   Paciente con o sin factores de riesgo, signos de alarma y parámetros inflamatorios alterados.

Signos de alarma: disnea, taquipnea Parámetros : Con una de las siguientes, Oximetría de Pulso: menor de 94%, Hemograma seriado linfopenia más pronunciada, neutrofilia ó ambas, Proteína C Reactiva: Positiva, RX: opacidades irregulares de vidrio esmerilado, TAC de Tórax: opacidades en vidrio esmerilado.  Manejo hospitalario.

•  Paciente con  síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA) y parámetros laboratoriales alterados .

Parámetros: Con una de las siguientes, Oximetría de Pulso: menor de 80%, Proteína C Reactiva: Positiva, RX: opacidades irregulares de vidrio esmerilado, TAC de Tórax: opacidades en vidrio esmerilado, consolidados, otros. Dímero D: elevado, Ferritina y procalcitonina: elevada, Enzimas hepáticas: elevadas.   Manejo hospitalario.